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细胞培养污染鉴定
发布日期:2019-08-01 16:59:58  /  发布人:爱游戏  /  浏览:
细胞株的污染鉴定、预防和处理问题。 普通微生物污染:培养基浑浊,高倍镜观察有微生物污染;按规定弃用并全面严格灭菌。 支原体污染:显微镜无法观察,依经验表现为细胞生长缓慢,有细胞漂浮等等,应通过PCR 等方法鉴定,如发现支原体污染,应按规定弃用,实验室要及时全面消毒灭菌,防止蔓延。 (有些常规性细胞学实验不受支原体污染影响,可以继续使用细胞传代,为防污染扩大蔓延,可以选择性的在培养基中加入高效价的其它种抗生素,并在隔离实验室操作和独立使用一切用具与培养基等)。 支原体污染及检测: (1)支原体污染在细胞培养中最常见、不易被查觉,但支原体污染可显著影响细胞功能干扰实验结果。支原体是介于细菌和病毒之间的目前所知能独立生活的最小微生物,它无细胞壁,形态呈高度多形性,最小直径0.2um,可通过滤器。 目前通过对国内100余株/系细胞的检测,形势不容乐观。污染率达30% ~ 60% 。课题组从国外引进细胞株/系也经常出现支原体的污染。支原体在污染细胞后,它通过影响细胞的DNA、RNA 的合成及急速消耗培养基中的氨基酸来抑制细胞的生长,并能降低细胞的融合率。因此,在运用各种细胞系进行实验研究时,首先要证明所用细胞有无支原体的污染。 (2)支原体污染后,培养基可不发生浑浊,细胞病变轻微或不明显,因此难以发现。目前,支原体检测的方法有以下几种。 (a)相差显微镜观察; (b)低张处理地衣红染色法; (c)荧光染色法; (d)酶标法; (e)PCR法:使用该方法进行检测。 优点:灵敏度高,检测耗时短,样品量小 (只需50ul细胞培养用液上清)。 缺点:引物及制剂费用较高。
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