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细胞培养常见问题原因分析及解决办法
发布日期:2018-03-30 12:35:11  /  发布人:爱游戏  /  浏览:

问题

可能原因

建议解决方法

培养液pH值变化太快

 

CO2张力不对。




培养瓶盖拧得太紧。


NaHCO3缓冲系统缓冲力不足。


培养液中盐浓度不正确

 


细菌、酵母或真菌污染

(1)按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度,2.0g/L 到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5% 到10%。

(2)改用不依赖CO2培养液。


松开瓶盖1/4圈。


加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。



CO2培养环境中改用基于Earle′s 盐配制的培养液,在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。


丢弃培养物。或用抗生素除菌。

 

培养液出现沉淀,但pH值不变

用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来


冰冻保存培养液

用去离子水反复冲洗玻璃器皿,然后除菌。

 

将培养液加热到37℃,摇动使其溶解如沉淀仍然存在,丢弃培养液。

培养液出现沉淀,同时pH发生变化

细菌或真菌污染

丢弃培养物。或用抗生素除菌。

 

培养细胞不贴壁

胰蛋白酶消化过度

支原体污染

培养液中无贴壁因子

缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。

分离培养物,检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。

悬浮细胞成簇

培养液中含钙、镁离子

 

支原体污染

 

蛋白酶过度消化使得细胞裂解释放DNA

用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞,轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。

分离培养物,检测支原体。如发现支原体污染,丢弃培养物。


DNase I处理细胞。

原代细胞培养物污染

原代培养组织在进入培养前已污染

培养前用含高浓度抗生素的平衡盐溶液反复冲洗组织。

培养细胞生长减慢

由于更换不同培养液或血清

 

培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰***或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。


培养物中有少量细菌或真菌污染



试剂保存不当

 

接种细胞起始浓度太低

细胞已老化

支原体污染

比较新培养液与原培养液成分,比较新血清与旧血清支持细胞生长实验。

增加起始培养细胞浓度。

让细胞逐渐适应新培养液。

换入新鲜配制培养液。

补加谷氨酰***或生长因子。

用无抗生素培养液培养,如发现污染,丢弃培养物。或用抗生素除菌。


血清需保存在-5 到-20℃。培养液需在2-8℃


避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存,并在2周内用完。

增加接种细胞起始浓度。

换用新的保种细胞。

分离培养物,检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。

培养细胞死亡

培养箱内无CO2

培养箱内温度波动太大


细胞冻存或复苏过程中损伤


培养液渗透压不正确

 

 

培养液中有毒代谢产物堆积

检测培养箱内CO2

检查培养箱内温度


取新的保存细胞种


检测培养液渗透压。注意:大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260  350 mOsm/kg。加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压。


换入新鲜培养液


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